肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶（CPT1)試劑盒可見分光光度法說明書
可見分光光度法 50管/48樣
正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
產(chǎn)品名稱：肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶（CPT1)試劑盒可見分光光度法
貨號：LZ-S01201-A
規(guī)格 : 50管/48樣
測試方法:可見分光光度法
產(chǎn)品分類：脂肪酸代謝系列
發(fā)貨地：上海
測定意義：
肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶是存在于線粒體內(nèi)膜的一類?；D(zhuǎn)移酶?？赡娴卮呋瘡孽；o酶A將?；D(zhuǎn)移至L-肉毒堿的反應(yīng)，在轉(zhuǎn)運脂肪酸通過線粒體內(nèi)膜的過程中起重要作用。
測定原理：
基于肉堿和脂酰輔酶A在丙二酰輔酶A存在與否的條件下，通過肉堿脂酰轉(zhuǎn)移酶(CPT-I)的作用，產(chǎn)生脂酰肉堿，并釋放出巰基輔酶A(COA-SH)，與Ellman試劑DN-TB反應(yīng)后，產(chǎn)生黃色的TNB。通過其吸收峰值得變化（412nm），來定量分析CPT-1的活性。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰、無水乙醇和蒸餾水
試劑的組成和配制：
試劑一：液體 50mL×1 瓶，-20℃保存；
試劑二：液體 10mL×1 瓶，-20℃保存；
試劑三：液體 1mL×1 支，-20℃保存；
試劑四：液體 55mL×1 瓶，4℃保存；
試劑五：粉劑×1 瓶，4℃保存；
試劑六：粉劑×1 支，-20℃保存；
樣本的前處理：
組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：
① 稱取約 0.1g 組織或收集 500 萬細胞，加入 1mL 試劑一和 10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
② 將勻漿液于 600g，4℃離心 5min。
③ 棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心 10min。
④ 上清液即胞漿提取物，可用于測定從線粒體泄漏的 CPT-1（此步可選做）。
⑤ 在步驟④的沉淀中加入 200uL 試劑二和 2uL 試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率 20％或200W，超聲 3 秒，間隔 10 秒，重復(fù) 30 次），用于線粒體 CPT-1 測定。
操作步驟:
1.加樣
1. 除包被外都需45度加樣
2.加樣體積要準(zhǔn)確
3.管底加樣,不能加在管壁上
4.加樣時不能產(chǎn)生氣泡
2.溫浴
1.加標(biāo)本后和加結(jié)合物后,應(yīng)立即放入按規(guī)定的反應(yīng)溫度的水浴箱。
2.各ELISA板不應(yīng)疊在一起。
3.為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋,或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕紗布的金屬濕盒中。
4.加入底物后,反應(yīng)的時間和溫度通常不做嚴(yán)格要求。 如室溫20℃,ELISA板可避光放在實驗臺上,以便 不時觀察,待對照管顯色適當(dāng)時,即可終止酶反應(yīng)。
3.洗滌
1.洗滌在ELISA過程中不是反應(yīng)步驟,但卻是決定實驗成敗的關(guān)鍵。
2.目的是洗去反應(yīng)液中沒有與固相抗原或 抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
4.讀板
1.陰性對照顏色極淺,在定性測定中一般可采用目視比色。
2.如用酶標(biāo)儀測定結(jié)果,準(zhǔn)確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標(biāo)儀的質(zhì) 量和軟件的算法。
生化檢測試劑盒常見問題：
在使用生化檢測試劑盒時，可能會遇到一系列常見問題，這些問題主要涉及到試劑盒的使用、保存、有效期、樣本處理以及實驗操作等方面。以下是一些常見的問題及其解決方法：
一、?測定原理?：生化試劑盒通過化學(xué)反應(yīng)或酶促反應(yīng)測定樣本中物質(zhì)的含量或酶活性。常用的儀器包括分光光度計和酶標(biāo)儀，它們的測定原理基于朗伯-比耳定律。土壤、水質(zhì)、動植物組織、血清、細胞細菌、食品等樣本均可進行測定?。
?二、選擇不同規(guī)格的試劑盒?：根據(jù)實驗的實際情況選擇合適的試劑盒。如果實驗室有酶標(biāo)儀且具備檢測波長，可以選擇微量法試劑盒；如果有分光光度計及相應(yīng)規(guī)格的比色皿，則可以選擇常量法或微量法試劑盒。建議購買前仔細閱讀說明書，確認自備的儀器和試劑是否符合要求?。
?三、保存方法?：收到試劑盒后，如果暫時不用，應(yīng)按照外包裝上指示的溫度保存。拆開包裝后，應(yīng)按照每個試劑的保存溫度進行保存，注意有些試劑忌反復(fù)凍融，有些粉劑溶解后性質(zhì)不穩(wěn)定?。
四、?有效期?：一般生化試劑盒的有效期為6個月，也有特殊貨號的有效期為1年。具體以實際收到貨物的標(biāo)簽信息為準(zhǔn)?1。
?五、樣本處理?：新鮮樣本和冷凍樣本都可用于大多數(shù)指標(biāo)的測定，但有些生理活性物質(zhì)容易降解，建議使用新鮮樣本測定。對于冷凍樣本，建議在-70℃或液氮中保存。樣本在不同溫度下的保存時間有所不同，例如4℃可保存一周，-20℃保存一個月，-80℃保存3個月?。
?六、土壤酶活性測定?：對于土壤酶活性的測定，建議將鮮土風(fēng)干并過篩后取樣，以測定的重復(fù)性。若使用鮮土測定，需樣本的顆粒大小一致且水分含量相似?。
七、?預(yù)測定?：在進行正式測定前，建議選擇2-3個預(yù)期結(jié)果差別較大的樣本做預(yù)實驗。通過預(yù)測定可以全面反映樣品特點、試劑質(zhì)量、儀器設(shè)備穩(wěn)定性和操作規(guī)范性，確保正式測定結(jié)果真實可靠?。
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